#文献分享# 利用aptamer在血清中检测特定物质的10篇文献
【题记】想了解一下核酸适配体在血清中的应用。所以做了一个调研，这是调研结果的小小总结。分享给大家，也许能给需要的朋友节省点时间。
文末附文献调研的整个过程
1. Alvarez-Martos, I., Moller, A. & Ferapontova, E.E. Dopamine Binding and Analysis in Undiluted Human Serum and Blood by theRNA-Aptamer Electrode. ACS Chem Neurosci 10, 1706-1715,doi:10.1021/acschemneuro.8b00616 (2019).
适配体修饰电极在未稀释的人血清和血液样品中常因为血清和血液成分的非特异性界面吸附而功能被抑制。这篇文章表明，多巴胺RNA aptamer固定在电极表面，进行样品流动分析，在血清样品注射之后，在磷酸盐缓冲溶液（PBS）中进行洗涤步骤，可以最小化血清蛋白的非特异性吸附。因此，可以用于未稀释血清样品的分析。
2. Wu, Y. et al. Ultrasensitive and high specificdetection of non-small-cell lung cancer cells in human serum and clinicalpleural effusion by aptamer-based fluorescence spectroscopy. Talanta 179,501-506, doi:10.1016/j.talanta.2017.11.029 (2018).
在这项工作中，基于结合新型花青染料，开发了一种简单，超敏感和高选择性的人NSCLC细胞A549检测策略。花青染料与适配体S6 G-四链体结构，对NSCLC细胞具有很好的特异性和亲和力，可诱导显著的荧光增强（约10 4）。此策略成功应用于人血清（5倍稀释的血清）或者临床胸腔积液等复杂介质中A549癌细胞的检测，有力地表明该方法可用于肺癌的早期诊断。
3． Su, Y. et al. Extraction and detectionof bisphenol A in human serum and urine by aptamer-functionalized magneticnanoparticles. Anal Bioanal Chem 410, 1885-1891, doi:10.1007/s00216-017-0801-0(2018).
将aptamer偶联到磁珠上，用该aptamer功能化的磁珠用于富集血清和尿样中的BPA。样品也是需要稀释的。
4． Alsager, O. A., Alotaibi, K. M.,Alswieleh, A. M. & Alyamani, B. J. Colorimetric Aptasensor of Vitamin D3: ANovel Approach to Eliminate Residual Adhesion between Aptamers and GoldNanoparticles. Sci Rep 8, 12947, doi:10.1038/s41598-018-31221-y (2018).
基于纳米金技术和适配体对维生素D3的检测。主要创新是增加了一步离心然后重悬的操作。之前没有离心时，由于aptamer可能由于与纳米金的非特异结合导致即使靶标结合后，适配体也不会完全从纳米金上脱落，从而不会产生聚集现象。增加了离心重悬步骤，就可以很好的避免这种情况的发生。【不过增加一步离心操作，对于大规模检测不是好消息】
5. Lee, B. H., Nguyen, V. T. & Gu, M. B. Highlysensitive detection of 25-Hydroxyvitamin D3 by using a target-induceddisplacement of aptamer. Biosens Bioelectron 88, 174-180,doi:10.1016/j.bios.2016.08.011 (2017).
是一篇筛选+检测应用的文章，靶标为25-OH-VD3。使用GO-SELEX筛选得到了高特异性和亲和力结合25-羟基维生素D3的适配体，基于ITC分析，确定结合亲和力为11nM（不过看ITC实验结果，感觉这个数据需要考究），并且基于AuNP的比色测定LOD为1μM。通过圆二色性（CD）和溶液相测试证实了靶标结合适配体后靶标诱导的位移。
文章中提到在超滤的人血清样品（Amicon®Ultra-0.5 3K截留装置）中实现检测。但是血液中检测到的浓度一直低于加标的浓度。
6． Yang, X. et al. Determination of freetryptophan in serum with aptamer--comparison of two aptasensors. Talanta 131,672-677, doi:10.1016/j.talanta.2014.08.023 (2015).
检测L-色氨酸，在25％血清中具有10-500μM的良好线性关系和6.97μM的检测限。两种方法，一是基于石墨烯吸附aptamer产生淬灭荧光信号，加入靶分子，竞争下来产生荧光；二是利用分子信标的方法。
7 Shi, H. et al. Locked nucleic acid/DNA chimeric aptamerprobe for tumor diagnosis with improved serum stability and extended imagingwindow in vivo. Anal Chim Acta 812, 138-144, doi:10.1016/j.aca.2013.12.023(2014).
这篇文章主要介绍通过修饰来增加DNA aptamer在血清中的稳定性。主要是LNA和3'-3'-胸苷（3'-3'-T）加帽。以TD05适配体为原型，修饰后其在血清中的半衰期增加了十倍，由0.5小时延长到5小时，且在荷瘤小鼠的清除率要慢得多。
8． Ge, J., Liu, Z. F. & Zhao, X. S.Cocaine Detection in Blood Serum Using Aptamer Biosensor on Gold Nanoparticlesand Progressive Dilution. Chinese Journal of Chemistry 30, 2023-2028,doi:10.1002/cjoc.201200256 (2012).
在不预处理样品的情况下实现血清中可卡因的同时定性和定量分析。作者使用的是胎牛血清。下图为检测原理图。
9． Bruno, J. G., Carrillo, M. P.,Phillips, T. & Edge, A. Serum inverts and improves the fluorescenceresponse of an aptamer beacon to various vitamin D analytes. Luminescence 27,51-58, doi:10.1002/bio.1324 (2012).
文章通过25-羟基维生素D3的具有light up效应的aptamer，当用于血清中检测时，出现 了更强的light off效应。作者推测可能是肌酸酐和尿素的原因，但实验结果认为不是肌酸酐和尿素所致。说明血清中还有很多未知的干扰物存在。
10． Huang, P. J. & Liu, J. Flowcytometry-assisted detection of adenosine in serum with an immobilized aptamersensor. Anal Chem 82, 4020-4026, doi:10.1021/ac9028505 (2010).
腺苷的检测限在缓冲液中为178μM，在30％血清中为167μM。最后，证明了检测可以在10微升90％的人血清中进行。【刘珏文教授的工作】左图为构建传感器，右图为流式检测的结果图。
我做文献调研大致的流程是：
1. 关键词检索（WOS、pubmed、scopus三个网站）
2. 全部导入endnote、采用二分法快速浏览文献。（参见公开课 https://study.163.com/course/introduction/1208964816.htm ）
3. 二分法，第一遍只浏览标题，将阅读的标题分两类：一类为不要的文献，一类为不确定的或需要的文献；（第一遍筛选完，文献减少了一大半）
4. 接着看摘要，还是二分法，又剔除掉一部分。
5. 剩下的应该都是有用的。利用endnote自动下全文进行阅读，来获取详细信息。如果阅读英文较慢，可以借助翻译，辅助阅读。
作者：罗昭锋
编辑：方晓娜
来源：简书
转载并整理已联系作者并获得授权
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昂普拓迈(Aptamy)致力于推动核酸适配体产业的发展，提供筛选周边产品，筛选服务，筛选培训。已经为来自全国的多个高校科研团队提供数百个科研产品及解决方案。
