#核酸适配体筛选专题#四、单链DNA PAGE煮胶液回收浓缩（含操作视频）

筛选专题 四


单链DNA PAGE胶煮胶液回收（含操作视频）

 
 

背景介绍

 

核酸适配体筛选过程中，单链制备是非常重要的一步，单链的质量也关乎筛选的成败。上一个专题我们已经介绍了用长短链方法制备ssDNA的切胶、碎胶、煮胶的步骤。本次专题主要介绍如何将煮沸出来的约2ml包含DNA的溶液浓缩和纯化。

 



 

实验方法

 

在分子克隆的所有操作中，最基本的操作是核酸的纯化，上一个专题我们介绍了用PAGE胶分离得到我们的ssDNA。

 

对于核酸的浓缩应用最广的是乙醇沉淀法，在中等浓度单价阳离子存在下（大多使用醋酸钠，pH5.2 ），加入一定量的无水乙醇（通常为2倍体积）后，所形成有核酸沉淀可被离心至管底而被回收，再通过无水乙醇清洗数次，烘干后溶于适当的缓冲液中。这种方法需要时间较长，且ssDNA经历干粉状态，需要再溶解，可能会对后续筛选实验产生一定影响。

 

更简单的方法是使用正丁醇浓缩，10分钟即可得到浓缩的单链DNA溶液，实验步骤如下图所示（详见视频）：

 



 

1.首先根据单链溶液的体积向管中加入一定体积的正丁醇，颠倒混匀。

 

2.使用台式高速离心机，9000rpm离心几分钟后（具体时间根据离心力不同调整），离心结束后可见溶液分层。

 

3.上层是澄清的正丁醇溶液，下层即为我们的单链DNA溶液。吸弃上层液。

 

4.若单链DNA的体积仍然很大，可以补加一定的正丁醇，混匀后再离心一次。直到浓缩后的体积达到200ul以内。

 

5.将得到的单链溶液进行透析，透析的目的是去除正丁醇溶液，将单链置换到筛选缓冲溶液中，保证每一轮筛选得到的单链都是在相同的缓冲液中。微量核酸透析的方法见下一次专题。

 

使用这种方法能简单、快速地浓缩核酸适配体筛选过程中的单链DNA 片段。本方法不需要昂贵的设备,甚至不需要复杂的试剂,只需使用正丁醇，通过少数几个步骤即可完成浓缩过程。结合后面的微量核酸透析步骤，纯化得到的 DNA 质量非常稳定，可放心用于下一轮筛选。

 


 

↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓视频（40秒）↓↓↓↓↓↓↓↓↓↓

 

以下视频提供了核酸适配体筛选过程中单链DNA溶液浓缩的步骤，供参考借鉴。

 


 



相关专题：

第一期 20190321 #筛选专题#乳浊液PCR--内含操作视频

第二期 20190403 #筛选专题#二、乳浊液PCR产物快速高效回收及浓缩--内含操作视频

第三期 20190412#筛选专题#三、长短链法制备ssDNA单链--切胶、碎胶、煮胶（内含操作视频）


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