#核酸适配体筛选专题#五、微量DNA样品透析（含操作小视频）

#筛选专题#五

微量DNA样品透析（含操作小视频）

背景介绍

实验方法

透析只需要使用专用的半透膜即可完成。通常是将半透膜制成袋状，将生物大分子样品溶液置入袋内，将此透析袋浸入水或缓冲液中，样品溶液中分子量较大的生物分子被截留在袋内，而盐和小分子物质不断扩散透析到袋外，直到袋内外两边的浓度达到平衡为止。保留在透析袋内未透析出的样品溶液称为“保留液”，袋外的溶液称为“渗出液”或“透析液”。透析温度通常情况下是4℃，升高温度可加快透析速度，频繁更换透析溶液，也可使透析效果更好。

透析膜可用动物膜和玻璃纸等，但用的较多的是用纤维素制成的透析膜，通常我们说的15000、25000、100000、250000等，表示的是单位道尔顿（D），截留分子量越大也就是说透过性越大。购买透析膜时需要选择合适的截留分子量，选择截留分子量值约为要保留的大分子分子量的一半，以获得至少90%的保留率。针对于核酸适配体文库使用的透析膜分子量通常为3.5KD的规格，适配体文库可以被很好的保留，而有机溶剂和盐等经过4度过夜透析，会被很好的去除。

图：透析装置以及透析膜的使用方法

操作步骤

1.实验材料准备：长度约2.5cm×2.5cm的透析袋；微量透析装置（可以用离心管盖加工处理）；透析液（一般为筛选缓冲液，如PBS等）

2. 将需要透析的DNA文库加入微量透析装置中，然后盖上透析膜，用密封圈封紧透析装置。（详见视频）

3. 把适量的透析液（缓冲液）加入50ml离心管或者是其他烧杯等容器中。透析液的体积应为样品体积量的100倍以上。（例如，在20ml以上透析液中透析200ul的样品）

4.把透析样品装置放入透析缓冲液中。透析时间根据具体的需求，通常情况下，4度过夜透析。透析的过程中，更换几次透析液效果会更好。

注意：透析袋一旦变湿，应浸泡在溶液中，不要让透析袋干燥。不断干燥会造成孔隙结构不可恢复的变化。

这种方法有较高的回收率，能够节约珍贵的样品，并能节约时间，特别适合摸条件的预实验。

使用这种方法能简单地透析核酸适配体筛选过程中的微量单链DNA 片段。本方法不需要昂贵的设备,回收率很高，能够节约珍贵的样品，纯化得到的 DNA 质量非常稳定，可放心用于下一轮筛选。




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以下视频提供了核酸适配体筛选过程中微量DNA透析过程，供参考




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