#核酸适配体筛选专题#二、乳浊液PCR产物快速高效回收及浓缩--内含操作视频

筛选专题二

核酸适配体筛选中ePCR产物 快！速！高！效！回收！


        核酸适配体筛选中的乳浊液PCR（emulsion PCR）是利用油包水乳液体系中的微液滴作为反应器进行的PCR扩增体系。近年来乳浊液PCR在生物医学领域的应用越来越广，可以实现在每个微液滴中进行单分子模板的扩增反应，从而避免常规PCR扩增过程中出现的扩增偏好（PCR bias）问题，提升核酸适配体的筛选成功率

        上一个专题我们已经说过乳浊液的制备方法：通常用振荡的方法即可得到乳浊液，虽然这样得到的油包水的液滴大小不一，但是对于核酸适配体筛选中的PCR步骤已经可以满足了。

        在我们的每一轮筛选实验中，使用乳浊液PCR进行扩增的时候，PCR mix和油的体积共约10ml，分装到PCR管进行扩增时大约需要96管，也就是12个八连排管！！ePCR的产品非常粘稠，容易挂壁，如果使用常规方法，用移液器一个个管子回收乳浊液到收集管中，需要至少15分钟，且很多都会残留在管壁，损失很大，如果想减少损失的量，用破乳的溶剂再去逐个清洗PCR管，然后回收溶液，时间又会增加至少一倍！收集乳浊液后进行破乳，浓缩单链，整个流程通常需要至少2小时。



图1：核酸适配体筛选中e-pcr产物


        我们提供了一种通过离心快速收集乳浊液的方法，方便快捷，且损失量非常小。见视频。同时还提供了乳浊液的破乳以及用正丁醇快速浓缩的步骤，整个乳浊液收集→破乳→浓缩大约30分钟即可完成，节省了大量的时间，提高了筛选效率。
筛选过程中的这些小窍门会将我们从繁琐、枯燥、简单的操作中解放出来，节省更多的时间和精力投入到更有价值的研究中。



图2：回收的乳浊液



图3：破乳浓缩后的e-pcr扩增产物--双链DNA


使用视频中提供的方法，

将乳浊液从12个八连排PCR管收集到离心管，

时间可从30分钟缩短到

3分钟

乳浊液收集→破乳→浓缩

30分钟全部搞定

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以上视频提供了核酸适配体筛选过程中乳浊液PCR产物的回收以及破乳和浓缩步骤，供各位同仁参考借鉴。





相关专题：上一期 20190321 #筛选专题#乳浊液PCR--内含操作视频




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